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HEPES作为IVT反应buffer的相关研究
2023-09-12
mRNA原液中采用HEPES作为buffer可能与前一步RNA聚合酶体外转录密切相关。
早在1987年便有研究报道使用HEPES缓冲对用于体外转录，在该研究中考察了不同反应条件下IHNV（感染性造血坏死病毒）的 RNA 聚合酶的体外转录，研究结果表明对比Tris，使用HEPES缓冲液可以最大限度地提高体外转录（IVT）效率。
研究中对缓冲条件的研究表明，HEPES缓冲液刺激的RNA合成量比Tris缓冲液高三倍（图1 a），最佳浓度的HEPES缓冲液为400mM。
英国帝国理工大学医学院传染病系系主任Robin Shattock是mRNA预防性疫苗领域的权威专家，与BioNTech以及PNI等公司都有较为密切的合作。其团队2021年发表关于saRNA体外转录体系优化的文章中，考察筛选了影响saRNA体外转录的关键影响因素，最终确定了采用40mM浓度的HEPES作为IVT反应体系buffer，具有更优的体外转录效果。
2016年BioNTech发表LPX-mRNA制剂的文章中mRNA原液中所采用的buffer为HEPES。该研究中使用HEPES缓冲液配置1mg/ml的RNA原液，用于进一步制备RNA-LPX。
HEPES作为IVT反应体系buffer具有优势，这是我们结合相关文献，推断BioNTech采用HEPES缓冲对作为mRNA原液buffer的原因。
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