此研究第一个突破是随着可电离脂质DLinKC2DMA的开发而实现的，大幅度地改善了LNP的效价和耐受度。有LNP siRNA基因沉默效价与可电离阳离子脂质的pKa存在着值得注意的依赖性，最适宜的pKa大约在6.4。偏离这个pKa 0.5个单位就可以是效价降低100倍甚至更多。关于脂质活性改进的机械化理解和可预测性能发现更多有效的可电离脂质体，其中heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-yl-4-(dimethylamino) butanoate, 后来称作 DLinMC3DMA (或简称 MC3)，与基准DLinDMA剂型相比在效价方面展现出超过两个数量级的提高。数据显示，在小鼠模型中，静脉注射LNP封装的siRNA后，FVII的沉默呈剂量依赖性。第二代含heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-yl-4-(dimethylamino) butanoate (DLin-MC3-DMA) 的LNP比第一代含1,2-dilinoleyl-N,N-dimethyl-3-aminopropane (DLinDMA) 的LNP要强两个以上的数量级。在非人灵长类证实了其强力的TTR沉默能力后，含有靶向人类TTR的siRNA MC3剂型以ALN-TTR02 (后来被称为 patisiran)转移至临床前研究。在大鼠和非人灵长类中的重复剂量毒理学研究表明，与第一代LNP相比，其治疗指数有了大幅的提高。

上图显示：含有第二代可电离氨基脂质的LNP siRNA系统对肝脏中沉默因子VII（FVII）的效力大大提高。