1、中文名称:异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)
2、英文名称:Isopropyl β-D-Thiogalactopyranoside
3、化学名称:异丙基β-D-硫代半乳糖苷
4、分子式:C9H18O5S
5、CAS:367-93-1
6、级别:化学试剂级
7、货号:
一、 理化性质
1、 结构:
2、性状:白色晶体粉末
3、纯度:≥99%
4、分子量:238.3
5、熔点:110℃-114℃
6、比旋光度:-32°
二、 运输与保存
推荐2-8℃存储。
三、 使用注意事项
1、含有 IPTG 的培养基 4℃避光保存,须在 1 周内使用。
2、为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3、本产品仅作科研用途。
四、 应用
1、储存液配制
①称取 0.238 g IPTG;加入10 mL去离子水充分溶解,配制 0.1 M 的储存液;
②用5-10 mL去离子水润湿0.22μm滤膜;
③上述 IPTG 溶液用0.22μm滤膜除菌,分装成 1 mL,-20℃冷冻保存。
2、 蓝白斑筛选
IPTG是β-半乳糖苷酶的活性诱导物质。基于这个特性,当pUC系列的载体DNA(或其他带有lacZ 基因载体DNA)以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X-gal和IPTG,由于β-半乳糖苷酶的α-互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出基因重组体。此外,它还可以作为具有lac或tac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。
(1) X-Gal、IPTG 加入琼脂培养基溶液
①高压灭菌已加琼脂的培养基,并冷却到 50℃左右。
②每毫升培养基内加入 10μL 20 mg/mL X-gal 溶液、10μL 0.1 M 的 IPTG(使其终浓度达到 1 mM);
③加入适量抗生素;
④混匀后按照平板大小倒入适量培养基,待培养基冷却至室温后,接种细菌于 37℃过夜培养。
(2)X-Gal、IPTG 加到琼脂平板表面
①于无菌超净工作台制备平板(如LB琼脂板);
②取40μL 0.1 M IPTG和120μL 20 mg/mL X-gal 混合,均匀地涂布于准备好的平板上;
备注:平板边缘较难充分涂布均匀,容易产生假阳性,因此,为了得到更好结果,建议后续操作中尽可能在平板中间挑取单克隆。
③37℃孵育直至所有液体被吸收(30 min 或更长)。接种细菌于 37℃过夜培养直到菌落形成。
④根据长出菌体的蓝白色,方便地挑选出基因重组体(白色为具有DNA插入片段的基因重组体)。