辉瑞/BioNTech在新冠mRNA疫苗的生产过程中使用到HEPES，同时审评报告反复强调了该辅料的无RNase的关键属性。

结合2016年BioNTech发表LPX-mRNA制剂的文章中mRNA原液中所采用的buffer为HEPES，基本可以推断BioNTech采用HEPES作为原液中的buffer且已获批上市的新冠疫苗原液采用HEPES作为缓冲对。

英国帝国理工大学医学院传染病系系主任Robin Shattock是mRNA预防性疫苗领域的权威专家，与BioNTech以及PNI等公司都有较为密切的合作。其团队2021年发表关于saRNA体外转录体系优化的文章中，考察筛选了影响saRNA体外转录的关键影响因素，最终确定了采用40mM浓度的HEPES作为IVT反应体系buffer，具有更优的体外转录效果。

四、使用HEPES缓冲体系时的注意事项

1、由于哌嗪基团的存在，当HEPES暴露于光线中时，会产生H2O2，这对培养的细胞或其它有生物活性的物体产生毒性，同时对氧化还原敏感的物质不宜共同使用，因此HEPES作为缓冲液的操作应尽量在避光条件下进行。

2、HEPES在生化领域常见的使用浓度为10-25mM，当浓度低于10mM时缓冲能力较弱，不能起到较好的缓冲效果，当浓度较高时对一些细胞可能具有毒害作用。

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