2016年BioNTech发表LPX-mRNA制剂的文章中mRNA原液中所采用的buffer为HEPES。该研究中使用HEPES缓冲液配置1mg/ml的RNA原液，用于进一步制备RNA-LPX。

HEPES作为IVT反应体系buffer具有优势，这是我们结合相关文献，推断BioNTech采用HEPES缓冲对作为mRNA原液buffer的原因。

三、HEPES相较于其他缓冲体系较为突出的特点

1、pKa随温度变化非常小，buffer的pH值随温度漂移很小。

2、性质稳定，HEPES不会与其他离子发生相互作用，一方面HEPES不会与其他离子发生络合影响其他离子功能，另外一方面其他离子的存在不会影响HEPES的缓冲能力。

3、细胞培养基中pH的维持主要依靠培养基中的碳酸氢盐和5%的CO2共同维持，当细胞处于开放环境时，CO2逸散会导致pH快速上升脱离生理pH范围，而添加HEPES缓冲对的培养基则不存在这方面问题。

4、HEPES不易穿过生物膜，不干扰细胞内的生化反应。

四、使用HEPES缓冲体系时的注意事项

1、由于哌嗪基团的存在，当HEPES暴露于光线中时，会产生H2O2，这对培养的细胞或其它有生物活性的物体产生毒性，同时对氧化还原敏感的物质不宜共同使用，因此HEPES作为缓冲液的操作应尽量在避光条件下进行。

2、HEPES在生化领域常见的使用浓度为10-25mM，当浓度低于10mM时缓冲能力较弱，不能起到较好的缓冲效果，当浓度较高时对一些细胞可能具有毒害作用。

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